義翹神州  MCHOGSI-1L  SMM CHO-GSI CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 不含L-谷an酰an 用于CHO GS表達(dá)系統(tǒng)

義翹神州 SMM CHO-GSI CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基-常備現(xiàn)貨

北京義翹神州科技股份有限公司是一家從事生物試劑研發(fā)、生產(chǎn)、銷售并提供技術(shù)服務(wù)的生物科技公司。所有產(chǎn)品都是自主研發(fā)和生產(chǎn)的，主要業(yè)務(wù)包括重組蛋白、抗體、基因和培養(yǎng)基等產(chǎn)品，以及重組蛋白、抗體的開發(fā)和生物分析檢測(cè)等服務(wù)，同時(shí)也為制藥公司或生物技術(shù)公司提供單克隆抗體候選藥物的臨床前規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)。義翹神州的產(chǎn)品能夠覆蓋生命科學(xué)研究的多個(gè)領(lǐng)域，為分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、干細(xì)胞研究等基礎(chǔ)科研方向和創(chuàng)新藥物研發(fā)提供“一站式"生物試劑產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。

義翹神州  MCHOGSI-1L  SuperNuclease核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒  SMM CHO-GSI CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 不含L-谷an酰an 用于CHO GS表達(dá)系統(tǒng)  1L，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：義翹神州

產(chǎn)品貨號(hào)：MCHOGSI-1L

產(chǎn)品名稱：SuperNuclease核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒  SMM CHO-GSI CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 不含L-谷an酰an 用于CHO GS表達(dá)系統(tǒng)

產(chǎn)品規(guī)格：1L

義翹神州  MCHOGSI-1L  SuperNuclease核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒  SMM CHO-GSI CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 不含L-谷an酰an 用于CHO GS表達(dá)系統(tǒng)  1L，產(chǎn)品說明：

產(chǎn)品描述

SMM CHO-GSI 培養(yǎng)基主要是為提高CHO穩(wěn)定株的蛋白產(chǎn)量而開發(fā)的，無血清，無動(dòng)物源成分的培養(yǎng)基。不含L-谷an酰an，使用時(shí)需加入4mM的L-谷an酰an。不含HT。推薦用于CHO GS表達(dá)系統(tǒng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

蛋白表達(dá)量高，細(xì)胞生長(zhǎng)好，嚴(yán)格的質(zhì)控，批次穩(wěn)定性好。

產(chǎn)品用途

僅用于科學(xué)研究，不推薦用于人類或動(dòng)物的診斷和治療。

儲(chǔ)存條件

2-8℃避光儲(chǔ)存12個(gè)月。

培養(yǎng)方法

（一）細(xì)胞復(fù)蘇

1.取出凍存管，迅速在37℃水浴鍋里融化，整個(gè)過程最好控制在1分鐘以內(nèi)。

2. 輕輕地混勻細(xì)胞并全部移到50ml的離心管中，逐滴加入 5-8ml在37℃水浴鍋里預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基。 100g，5min離心細(xì)胞。

3. 倒掉上清，用10-20mL在37℃水浴鍋里預(yù)熱好的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，放到100mL培養(yǎng)瓶中。 然后將細(xì)胞放到37℃，5%的CO2恒溫?fù)u床中，110-175rpm培養(yǎng)。

4. 2-5天后取樣計(jì)數(shù)細(xì)胞密度和活率，如果細(xì)胞密度達(dá)到1.0X106cells/ml，則24進(jìn)行正常傳代培養(yǎng)； 如果細(xì)胞密度低于1.0X106cells/m，則收集細(xì)胞進(jìn)行離心處理，100g，5min。 然后重懸到20-30ml已經(jīng)在37℃水浴鍋里孵育好的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

5. 細(xì)胞生長(zhǎng)正常后，傳代時(shí)起始密度控制在0.3X106cells/ml ，3-4天傳一次代。

注意事項(xiàng)：凍存管融化速度越快越好； 由于剛復(fù)蘇的細(xì)胞比較脆弱，所以整個(gè)過程要輕以免損傷細(xì)胞。

（二）細(xì)胞傳代

1. 取樣計(jì)數(shù)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞密度。

2. 按照起始細(xì)胞密度0.3-0.4X106cells/ml，計(jì)算所需細(xì)胞懸液和培養(yǎng)基的用量傳代，100ml的培養(yǎng)瓶中放15-20ml培養(yǎng)（或250ml的培養(yǎng)瓶放50-60ml培養(yǎng)）。 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5%CO2，搖床轉(zhuǎn)速：110-175rpm。

3. 每3-4天傳一次代，起始細(xì)胞密度傳到0.2-0.3X106細(xì)胞/ml。

如何使 CHO 穩(wěn)定的應(yīng)變細(xì)胞適應(yīng) SMM CHO-SI 培養(yǎng)基：

通常情況下，細(xì)胞不經(jīng)過馴化而能直接適應(yīng)SMM CHO-GSI培養(yǎng)基，下面我們推薦2種方式來更換培養(yǎng)基：1）直接更換； 2）逐步更換。 首先選用的細(xì)胞要在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，同時(shí)細(xì)胞活率大于90%。

（三）直接更換

1. 細(xì)胞培養(yǎng)在加5-10%血清傳統(tǒng)的培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基里，直接稀釋傳代到SMM CHO-GSI培養(yǎng)基，細(xì)胞密度控制在0.3-0.4X106細(xì)胞/ml。

2.然后放入5%CO2、37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，110-175rpm轉(zhuǎn)速條件下培養(yǎng)。

3. 3-5天后進(jìn)行傳代或者換液

4. 繼續(xù)傳代培養(yǎng)，起始細(xì)胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml，直到wan全適應(yīng)SMM CHO-GSI培養(yǎng)基。

5. 經(jīng)過幾代在100%的 SMM CHO-GSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)，傳代后4-6天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2-3X106cells/ml，細(xì)胞活率大于90%。 這時(shí)說明細(xì)胞已經(jīng)wan全適應(yīng)SMM CHO-GSI培養(yǎng)基。 注意: 如果直接更換沒有成功，則進(jìn)行逐步更換的方法養(yǎng)基。

注意: 如果直接更換沒有成功，則進(jìn)行逐步更換的方法

（四）逐步更換

1.細(xì)胞培養(yǎng)在加5-10%血清傳統(tǒng)的培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基里，稀釋傳代，細(xì)胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml，原培養(yǎng)基與SMM CHO-GSI培養(yǎng)基的比例為75：25。

2.然后放入5%CO2、37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，110-175rpm。

3. 3-5天后進(jìn)行傳代，如果細(xì)胞生長(zhǎng)正常，則傳代時(shí)原培養(yǎng)基與SMM CHO-GSI培養(yǎng)基的比例為50:50. 細(xì)胞密度仍控制在0.3-0.4X106細(xì)胞/ml。

重復(fù)步驟3，逐漸增加SMM CHO-GSI培養(yǎng)基的比例（25：75;原始培養(yǎng)基與SMM CHO-GSI培養(yǎng)基的比例為10：90），直到SMM CHO-GSI培養(yǎng)基的100%。

5.在100%的SMM CHO-GSI培養(yǎng)基中，傳代后4-6天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2-3X106cells/ml，細(xì)胞活率大于90%。這時(shí)說明細(xì)胞已經(jīng)wan全適應(yīng)SMM CHO-GSI培養(yǎng)基。

（五）凍存細(xì)胞

凍存細(xì)胞時(shí)CHO cells 要處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期同時(shí)細(xì)胞活率在90%以上。

1.取樣計(jì)數(shù)細(xì)胞，根據(jù)凍存管數(shù)計(jì)算所用細(xì)胞懸液體積和凍存液的體積，比例如下：92.5%的培養(yǎng)基混合物（50% 的新鮮SMM CHO-GSI培養(yǎng)基+50% 條件SMM CHO-GSI培養(yǎng)基 ）+ 7.5% DMSO，最終的細(xì)胞數(shù)為 5 x 106cells/ 管。

2.準(zhǔn)備相應(yīng)體積的凍存培養(yǎng)基：46.25% 的新鮮SMM CHO-GSI培養(yǎng)基 + 7.5% DMSO，放在4°C 備用。 凍存培養(yǎng)基最好為當(dāng)天配制。

3.通過100g，5-10min離心收集細(xì)胞，留46.25%條件培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，然后逐滴加入事先準(zhǔn)備好的放4°C 的凍存培養(yǎng)基。

4.混合均勻后分裝細(xì)胞到凍存管中，一般2ml的凍存管放1-1.5ml，貼好標(biāo)簽。

5.然后放到凍存盒中，放入-80°C 冰箱(每分鐘下降1°C)。

6.80℃冰箱中過夜放置（至少放置24小時(shí)），轉(zhuǎn)移細(xì)胞到液氮罐中，推薦儲(chǔ)存條件在-125°C to -200°C。

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